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液相色譜柱的維修與保養
點(diǎn)擊次數：3398 更新時(shí)間：2017-08-31
分析液相色譜柱的維修與保養
一、液相色譜柱的維護：
我們在使用新的色譜柱應該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來(lái)測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應時(shí)常對色譜柱進(jìn)行測試。而且在使用的過(guò)程中常常有堵塞的現象，造成這種現象的主要原因是①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進(jìn)樣器等中的不溶物④ 柱內不溶物的形成等。如果當色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進(jìn)行修復，先，使用含鹽緩沖液后(如離子對試劑)應用溶解性強的溶劑(如水)進(jìn)行沖洗。其次，先斷開(kāi)檢測器，然后用對來(lái)自樣品中的物質(zhì)有強溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗，對于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等，在此條件下，應避免溶劑的pH低于2或高于8。zui后如果經(jīng)過(guò)上述還是沒(méi)有修復，色譜柱壓力還是沒(méi)有下降，則要斷開(kāi)檢測器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓，若壓力穩定下降，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5 ml/min 流速沖洗一小時(shí)。如果壓力不下降，則要看內置過(guò)濾器是否被堵塞，如果被堵塞應沖洗或更換，若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞，柱子將不可能被*恢復，只能通過(guò)去掉進(jìn)口端的部分填料，重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復。而且修復的厚度是2-5mm
二、液相色譜柱的保養：色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結果保存起來(lái)，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測試所使用的條件是*條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。我們在對色譜柱使用前進(jìn)行測試以后，我們要根據不同的情況對色譜柱進(jìn)行保養：①反相色譜柱每天實(shí)驗后的保養：使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。②長(cháng)期保存色譜柱：如色譜柱要長(cháng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以?xún)Υ嬗诩兗状蓟蛞译嬷?，正相柱可以?xún)Υ嬗趪栏衩撍蟮募冋和橹?，離子交換柱可以?xún)Υ嬗谒?含防腐劑*或柳硫汞)中，并將購買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫.
三、 液相色譜柱的維護與保養在液相色譜儀中的應用：液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發(fā)展起來(lái)的分離分析技術(shù)，是現代分離測定的重要手段。問(wèn)世以來(lái)，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。液相色譜柱是消耗品，會(huì )隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數增加，出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰，柱效下降。需要定期進(jìn)行*清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：
1.反相柱 分別用甲醇:水=90:10，純甲醇(HPLC級)，異丙醇(HPLC級)，二氯甲烷(HPLC級)等溶劑作為流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
2. 正相柱 分別用正己烷(HPLC級)，異丙醇(HPLC級)，二氯甲烷(HPLC級)，甲醇(HPLC級)等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于 20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過(guò)高).注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動(dòng)相必須嚴格脫水。
3.離子交換柱 長(cháng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
